液相色谱法是20世纪60年代末在经典液相色谱的基础上发展起来的一种现代色谱分析方法，历*曾出现过不同的叫法，如，高压液相色谱（HPLC）、高速液相色谱（HSLC）和高分辨液相色谱（HRLC）。就分离原理而言，HPLC与经典柱层析（色谱）没有本质的区别，但由于采用了高压输液泵、微粒固定相和高灵敏度检测器，HPLC在分析速度、分离效率、检测灵敏度和操作自动化方面，都达到了可与GC相比的程度，并保持了样品适用范围广、流动相种类多和便于制备的柱层析优点，在生物工程、制药工业、食品工业、环境监测和石油化工等领域获得了广泛的应用！

HPLC的特点：

①样品适用范围广；

②分离效率高；

③检测灵敏度高；

④分析速度快；

⑤样品回收方便；

液相色谱法的分类：

HPLC的分类方法有多种，比较常见的有三种：

（1）按照分离机理分类：

①吸附色谱

②分配色谱

③离子交换色谱（IEC）

④体积排阻色谱（SEC）

⑤亲和色谱（AC）

（2）按照色谱柱洗脱动力学分类:

①洗脱法

②前沿法

③置换法

（3） 按照分离目的分类：

①分析液相色谱

②制备液相色谱

 HPLC分析常用的样品处理技术:

粉碎、冷冻干燥、气体萃取（顶空分析和吹扫-捕集）、溶剂萃取（回流或索氏萃取，加压溶剂萃取）、固相萃取、固相微萃取、超临界流体萃取、微波萃取、超声波萃取、微透析、衍生化、膜分离、蒸馏、吸附、离心、过滤、浓缩和溶解等。

色谱定性分析方法

标准物质对照定性；

利用文献数据定性；

利用选择性检测器定性；

在线联用仪器定性；

其它定性方法；

液相色谱仪使用及维护方法

液相色谱仪使用时要非常注意！

使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。 

液相色谱柱使用注意：

卡套柱的安装（加预柱）：

将卡套架套入柱芯

将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯

将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片

将“子弹头”预柱放入卡套片内

将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧

然后依同样的顺序连接好柱子的另一端

平衡色谱柱 

反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10～20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水“过渡”。

硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡

如何平衡色谱柱？

平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡）

色谱柱的再生

进行色谱柱再生时，应使用一个廉价的泵，我们建议不使用您的液相色谱仪上的泵。 

注意：

在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此，应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液*流出。如果简单的有机溶剂/水的处理不能够*洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。

液相色谱的常用术语

1.色谱曲线（chromatogram）：

在色谱法中，当样品加入后，样品中各组分随着流动相的不断向前移动而在两相间反复进行溶解、挥发，或吸附、解吸的过程。如果各组分在固定相中的分配系数（表示溶解或吸附的能力）不同，就有可能达到分离。

分配系数小的组分滞留在固定相中的时间短，在柱内移动的速度快，先流出柱子；分配系数大的组分滞留在固定相中的时间长，在柱内移动的速度慢，后流出柱子；分离后的各组分经检测器转换成电信号而记录下来，得到一条信号随时间变化的曲线，称为色谱流出曲线或 “色谱峰”，理想的色谱流出曲线应该是正态分布曲线。

2.（色谱）峰（chromatographic peak）：

色谱柱流出组分通过检测器系统时所产生的响应信号的微分曲线。

3.峰底（peak base）：

峰的起点与终点之间的连接的直线。

4.峰高（h，peak height）：

色谱峰zui大值点到峰底的距离。

5.峰宽（W ，peak width）：

在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点的距离。

6.半高峰宽（Wh/2 ，peak with d at half height）：

通过峰高的中点作平行于峰底的直线，此直线与峰两侧相交两点之间的距离（图1 中的HJ）。

7.峰面积（A ，peak area）：

峰与峰底之间的面积（图1中的CHEJDC）。

8.拖尾峰（tailing peak）：

后沿较前沿平缓的不对称的峰。

9.前伸峰（leading peak）：

前沿较后沿平缓的不对称的峰。（又叫伸舌峰、前延峰）

10.假峰（ghost peak）：

除组分正常产生的色谱峰外，由于仪器条件的变化等原因而在谱图上出现的色谱峰，即并非由试样所产生的峰。这种色谱峰并不代表具体某一组分，容易给定性、定量带来误差。（又叫鬼峰）

11.畸峰（distrorted peak）：

形状不对称的色谱峰，前伸峰、拖尾峰都属于这类。 

12.反峰（negative peak）：

也称倒峰、负峰，即出峰的方向与通常的方向相反的色谱峰。