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[一]保留时间变化
1.柱温变化 柱恒温，必要时需配置恒温箱
2.等度与梯度间未能充分平衡 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱
3.缓冲液容量不够 用25mmol/L的缓冲液
4.柱污染 每天冲洗柱
5.柱内条件变化 稳定进样条件,调节流动相
6.柱快达到寿命 采用保护柱
[二]保留时间缩短
1.流速增加 检查泵,重新设定流速
2.样品超载 降低样品量
3.键合相流失 流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向
4.流动相组成变化 防止流动相蒸发或沉淀
5.温度增加 柱恒温
[三]保留时间延长
1.流速下降 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡
2.硅胶柱上活性点变化 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱
3.键合相流失 同前[二]3
4.流动相组成变化 同前[二]4
5.温度降低 同前[二]5
[四] 出现肩峰或分*
1.样品体积过大 用流动相配样,总的样品体积小于*峰的15%
2.样品溶剂过强 采用较弱的样品溶剂
3.柱塌陷或形成短路通道 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件
4.柱内烧结不锈钢失效 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品
5.进样器损坏 更换进样器转子
[五]鬼峰
1.进样阀残余峰 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗
2.样品中未知物 处理样品
3.柱未平衡 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 [尤其是离子对色谱]
4.三fu乙酸[TFA]氧化[肽谱] 每天新配,用抗氧化剂
5.水污染[反相] 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水
[六] 基线噪声
1.气泡[尖锐峰] 流动相脱气,加柱后背压
2.污染[随机噪声] 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂
3.检测器灯连续噪声 更换氘灯
4.电干扰[偶然噪声] 采用稳压电源,检查干扰的来源[如水浴等]
5.检测器中有气泡 流动相脱气,加柱后背压
[七]峰拖尾
1.柱超载 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相
2.峰干扰 清洁样品,调整流动相
3.硅羟基作用 加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品
4.同前[四]4 同前[四]4
5.同前[四]3 5.同前[四]3
6.死体积或柱外体积过大 连接点降至zui低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管
7.柱效下降 用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱
[八]峰展宽
1.进样体积过大 同[四]1
2.在进样阀中造成峰扩展 进样前后排出气泡以降低扩散
3.数据系统采样速率太慢 设定速率应是每峰大于10点
4.检测器时间常数过大 设定时间常数为感兴趣*峰半宽的10%
5.流动相粘度过高 增加柱温,采用低粘度流动相
6.检测池体积过大 用小体积池,卸下热交换器
7.保留时间过长 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱
8.柱外体积过大 将连接管径和连接管长度降至zui小
9.样品过载 进小浓度小体积样品
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